非小细胞肺癌中血清外泌体人源微小RNA-195-5p 的表达及临床意义

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-6902.2025.02.011

中华肺部疾病杂志(电子版) ›› 2025, Vol. 18 ›› Issue (02) : 261 -265. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-6902.2025.02.011

论著

非小细胞肺癌中血清外泌体人源微小RNA-195-5p 的表达及临床意义

马秋双¹, 杨茗涵¹, 王耀林², 兰莹莹¹, 刘子腾³, 张金库¹^,^†(

)

^1. 071030 保定，保定市第一中心医院河北省分子病理与肿瘤早期诊断重点实验室
^2. 071030 保定，保定市第一中心医院呼吸与危重症医学科
^3. 071030 保定，保定市第一中心医院心胸外科

收稿日期:2025-03-13 出版日期:2025-04-25
通信作者: 张金库
基金资助:
河北省自然科学基金项目（H2024104001）

Expression and clinical significance of serum exosomal human microRNA-195-5p in non-small cell lung cancer

Qiushuang Ma¹, Minghan Yang¹, Yaolin Wang², Yingying Lan¹, Ziteng Liu³, Jingku Zhang¹^,^†()

^1. Key Laboratory of Molecular Pathology and Early Diagnosis of Tumors in Hebei Province，Baoding First Central Hospital，Baoding 071030，China
^2. Department of Respiratory and Critical Care Medicine，Baoding First Central Hospital，Baoding 071030，China
^3. Department of Cardiothoracic Surgery，Baoding First Central Hospital，Baoding 071030，China

Received:2025-03-13 Published:2025-04-25
Corresponding author: Jingku Zhang

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引用本文：

马秋双, 杨茗涵, 王耀林, 兰莹莹, 刘子腾, 张金库. 非小细胞肺癌中血清外泌体人源微小RNA-195-5p 的表达及临床意义[J/OL]. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2025, 18(02): 261-265.

Qiushuang Ma, Minghan Yang, Yaolin Wang, Yingying Lan, Ziteng Liu, Jingku Zhang. Expression and clinical significance of serum exosomal human microRNA-195-5p in non-small cell lung cancer[J/OL]. Chinese Journal of Lung Diseases(Electronic Edition), 2025, 18(02): 261-265.

目的

分析人源微小RNA-195-5p（human microRNA-195-5p，hsa-miR-195-5p）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者血清外泌体中的表达及临床意义。

方法

选择2021 年1 月至2024 年12 月我院收治的NSCLC 患者107 例为观察组，同期经病理检查确诊为良性肺部疾病患者50 例为对照组。纳米颗粒追踪分析（nanoparticle tracking analysis，NTA）、透射电镜（transmission electron microscope，TEM）和蛋白质免疫印迹（Western blot）对外泌体进行表征。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，rtPCR）检测两组血清外泌体中hsa-miR-195-5p，分析hsa-miR-195-5p 对NSCLC 诊断价值，比较不同病理特征NSCLC 患者hsa-miR-195-5p 水平差异。

结果

TEM 结果显示，细胞外囊泡经典完整膜结构形态直径约100 nm。 NTA 分析显示，血清中分离的囊泡直径（77.20±16.15） nm。蛋白质免疫印迹（Western blot）检测显示，样本中存在CD9、CD63、TSG101 和Annexin V 表达。观察组血清外泌体hsa-miR-195-5p 水平0.28（0.15，0.65）低于对照组1.13（0.44，2.05）（P=0.000）。血清外泌体hsa-miR-195-5p 诊断NSCLC，曲线下面积（area under curve，AUC）（95%CI）为0.824（0.752～0.895），灵敏度为0.766，特异度为0.780。 hsa-miR-195-5p 联合糖类抗原-125（carbohydrate antigen-125，CA125）、癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）、神经元特异性烯醇化酶（neuronspecific enolase，NSE）和人附睾蛋白4［human epididymal protein 4，HE-4］）诊断NSCLC 的AUC=0.895（Z=-3.099，P=0.001）。血清外泌体hsa-miR-195-5p 低表达水平（＜0.28）与疾病分期（Ⅲ期）高有关（P=0.015）。

结论

NSCLC 患者血清外泌体hsa-miR-195-5p 表达水平降低，对良恶性肺部疾病性质鉴别诊断具有临床意义，有助于NSCLC 诊断及高危人群筛查。

关键词: 非小细胞肺癌, 人源微小RNA-195-5p, 生物信息学, 肿瘤标志物

Objective

To analyze the expression and clinical significance of human microRNA-195-5p（hsa-miR-195-5p） in serum exosomes of patients with non-small cell lung cancer （NSCLC）.

Methods

All of 107 patients with NSCLC admitted to our hospital from January 2021 to December 2024 were selected as the observation group，and 50 patients with benign lung disease confirmed by pathological examination during the same period were selected as the control group. Exosomes were characterized by nanoparticle tracking analysis（NTA），transmission electron microscope （TEM） and Western blot. real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction （rtPCR） was used to detect hsa-miR-195-5p in serum exosomes of the two groups，and the diagnostic value of hsa-miR-195-5p in NSCLC was analyzed. The levels of hsa-miR-195-5p in NSCLC patients with different pathological features were compared.

Results

TEM showed that the classical complete membrane structure of extracellular vesicles was about 100 nm in diameter. NTA analysis showed that the diameter of the isolated vesicles in serum was （77.20±16.15） nm. Western blot analysis revealed the expression of CD9，CD63，TSG101 and Annexin V in the samples. The level of serum exosome hsa-miR-195-5p in the observation group was 0.28 （0.15，0.65） lower than that in the control group 1.13 （0.44，2.05）（P=0.000）.The area under curve （AUC）（95%CI） of serum exosome hsa-miR-195-5p for diagnosis of NSCLC was 0.824（0.752 ～0.895），the sensitivity was 0.766，and the specificity was 0.780. hsa-miR-195-5p combined carbohydrate antigen-125 （CA125），carcino-embryonic antigen，CEA），neuronspecific enolase （NSE），and human epididymal protein 4 （HE-4） in diagnosis of NSCLC had an AUC of 0.895 （Z=-3.099，P=0.001）.Low expression level of serum exosome hsa-miR-195-5p （＜0.28） was associated with higher disease stage （P=0.015）.

Conclusion

The decreased expression level of serum exosome hsa-miR-195-5p in patients with NSCLC has clinical significance in the differential diagnosis of benign and malignant pulmonary diseases，and it is helpful for the diagnosis of NSCLC and screening of high-risk groups.

Key words: Non-small cell lung cancer, Human microRNA-195-5p, Bioinformatics, Tumor biomarker

图1 患者CT 影像图男，63 岁，肺腺癌，CT 可见左肺上叶占位和团块状高密度影。图A 为CT 平扫；图B 为CT 增强；图C 为CT 增强动脉期；图D 为CT 增强静脉期

图2 血清外泌体表征。图A 为受试对象血清中提取外泌体的TEM 图像；图B 为血清外泌体NTA 追踪；图C 为血清外泌体标记CD9、CD63、TSG101 和AnnexinV 蛋白质印迹分析

表1 两组患者血清外泌体miRNAs 表达

组　别	例数	hsa-miR-3173-5p（ $\overset{ˉ}{x}$ ± s ）	hsa-miR-195-5p［M（P₂₅，P₇₅）］	hsa-miR-296-5p（ $\overset{ˉ}{x}$ ± s ）	hsa-miR-651-5p［M（P₂₅，P₇₅）］	hsa-miR-1307-5p（ $\overset{ˉ}{x}$ ± s ）	hsa-miR-424-5p［M（P₂₅，P₇₅）］
观察组	107	0.95±0.18	0.28（0.15，0.65）	0.97±0.11	1.21（0.76，1.47）	1.07±0.31	1.10（0.72，1.35）
对照组	50	1.00±0.09	1.13（0.44，2.05）	1.00±0.05	1.09（0.75，1.36）	1.01±0.12	1.03（0.76，1.27）
Z / t 值		1.856	-5.364	1.839	-1.053	1.321	-1.122
P值		0.065	0.000	0.068	0.179	0.188	0.147

表1 两组患者血清外泌体miRNAs 表达

组　别	例数	hsa-miR-3173-5p（ $\overset{ˉ}{x}$ ± s ）	hsa-miR-195-5p［M（P₂₅，P₇₅）］	hsa-miR-296-5p（ $\overset{ˉ}{x}$ ± s ）	hsa-miR-651-5p［M（P₂₅，P₇₅）］	hsa-miR-1307-5p（ $\overset{ˉ}{x}$ ± s ）	hsa-miR-424-5p［M（P₂₅，P₇₅）］
观察组	107	0.95±0.18	0.28（0.15，0.65）	0.97±0.11	1.21（0.76，1.47）	1.07±0.31	1.10（0.72，1.35）
对照组	50	1.00±0.09	1.13（0.44，2.05）	1.00±0.05	1.09（0.75，1.36）	1.01±0.12	1.03（0.76，1.27）
Z / t 值		1.856	-5.364	1.839	-1.053	1.321	-1.122
P值		0.065	0.000	0.068	0.179	0.188	0.147

表2 血清外泌体hsa-miR-195-5p 与NSCLC 患者临床特征的关系

临床特征	hsa-miR-195-5p 低表达（n=52）	hsa-miR-195-5p 高表达（n=55）	χ ²	P值
体质量指数　［n（％）］			0.177	0.674
≤24.9 kg/ m²	20（38.46）	19（34.55）
＞24.9 kg/ m²	32（61.54）	36（65.46）
吸烟史［n（％）］	46（88.46）	45（81.82）	0.928	0.336
EGFR/ KRAS突变［n（％）］	22（42.31）	30（54.55）	1.602	0.206
TNM 分期［n（％）］			8.455	0.015
Ⅰ	21（40.38）	35（63.64）
Ⅱ	16（30.77）	15（27.27）
Ⅲ	15（28.85）	5（9.09）
病理亚型［n（％）］			0.961	0.327
肺腺癌	31（59.62）	37（67.27）
肺鳞癌	19（36.54）	15（27.27）
其他	2（3.85）	3（5.45）

表2 血清外泌体hsa-miR-195-5p 与NSCLC 患者临床特征的关系

临床特征	hsa-miR-195-5p 低表达（n=52）	hsa-miR-195-5p 高表达（n=55）	χ ²	P值
体质量指数　［n（％）］			0.177	0.674
≤24.9 kg/ m²	20（38.46）	19（34.55）
＞24.9 kg/ m²	32（61.54）	36（65.46）
吸烟史［n（％）］	46（88.46）	45（81.82）	0.928	0.336
EGFR/ KRAS突变［n（％）］	22（42.31）	30（54.55）	1.602	0.206
TNM 分期［n（％）］			8.455	0.015
Ⅰ	21（40.38）	35（63.64）
Ⅱ	16（30.77）	15（27.27）
Ⅲ	15（28.85）	5（9.09）
病理亚型［n（％）］			0.961	0.327
肺腺癌	31（59.62）	37（67.27）
肺鳞癌	19（36.54）	15（27.27）
其他	2（3.85）	3（5.45）

表3 血清外泌体hsa-miR-195-5p 与常规肿瘤标志物诊断NSCLC 的ROC 曲线分析

变　量	截断值	约登指数	灵敏度	特异度	AUC	95％CI
hsa-miR-195-5p	0.680	0.546	0.766	0.780	0.824	0.752～0.895
常规肿瘤标志物	0.655	0.353	0.847	0.506	0.723	0.638～0.808
hsa-miR-195-5p+常规肿瘤标志物	0.733	0.672	0.832	0.860	0.895	0.827～0.959

表3 血清外泌体hsa-miR-195-5p 与常规肿瘤标志物诊断NSCLC 的ROC 曲线分析

变　量	截断值	约登指数	灵敏度	特异度	AUC	95％CI
hsa-miR-195-5p	0.680	0.546	0.766	0.780	0.824	0.752～0.895
常规肿瘤标志物	0.655	0.353	0.847	0.506	0.723	0.638～0.808
hsa-miR-195-5p+常规肿瘤标志物	0.733	0.672	0.832	0.860	0.895	0.827～0.959

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